Identification, purification, isolement et quantifications de principes actifs de Mitracarpus scaber Zuncc et évaluation de leurs activités antimicrobiennes sur Dermatophilus congolencis

Abstract

La dermatophilose bovine est une dermatose exsudative caractérisée par une lésion croûteuse sur le corps des bovins. C’est une zoonose mineure qui sévit sous forme enzootique et causée par un actinomycète gram positif typique (Dermatophilus congolensis). Les antibiotiques utilisés jusqu'à présent par voie parentérale sont peu efficaces à cause du caractère récidivant de la maladie. Dans le but de trouver une approche phytothérapeutique, différentes plantes utilisées en médecine traditionnelle pour traiter des dermatoses ont été testées sur des animaux malades parmi lesquelles le Mitracarpus scaber Zucc. ex Schult + Seult.f. (RUBIACEAE) qui s'est montré particulièrement efficace. Notre travail avait pour but de vérifier l'activité antimicrobienne d'extraits de M scaber sur D. congolensis et de tenter d'identifier et d'isoler les molécules responsables de cette activité. Nous avons montré que l’extrait éthanolique de la partie aérienne de M. scaber présentait une activité antimicrobienne in vitro (CM = 1000ug/ml) sur le D congolensis. De cet extrait, nous avons identifié, après différents fractionnements (liquide - liquide, CPA et MPLC), par différentes méthodes (CCM, GC/MS, LC/MS) 12 molécules (la 2-azaanthraquinone, L'acide oléanolique, l'acide ursolique, l’u-amyrine, la B-amyrine, le lupéol, Ie campestanol, le stigmastérol, le B-sitostérol, le squalène, le phytol et la rutine) dont seules la 2-azaanthraquinone et la rutine étaient connus pour être présents dans des échantillons de M. scaber provenant d'autres pays. Parmi les composés identifiés, la 2-azaanlhraquinone, l'acide oléanolique, l'acide ursolique, l'a-amyrine, la B-arnyrine et le lupéol se sont révélés actifs sur le D congolensis la 2-azaanthraquinone, l’acide oléanolique et l'acide ursolique étant les plus actifs. Nous avons ensuite isolé, purifié et déterminé la structure de ces trois derniers. Dans une deuxième partie de notre travail, nous avons développé et validé des méthodes de dosage par chromatographie sur couche mince à haute performance-densitométrie et/ou chromatographie liquide à haute performance pour quantifier les trois composes isolés dans I' extrait éthanolique. Grâce à ces dosages nous avons pu montrer que l’acide oléanolique et ['acide ursolique sont présents respectivement à 0.0043% et 0.0125% dans la plante et l'azaanthraquinone à 0.00848% -. Nous avons également analysé la composition de l'huile essentielle (0, 1 ul/g de poudre de plante) et nous y avons mis en évidence la présence d’acides gras et d’aldéhydes linéaires ainsi que de différents dérivés terpéniques comme le limonène, le bornéol, l’a-caryophyllène, le B-caryophyllène, l'oxyde de caryophyllène, le phytol ou l'isophytol. Les essais sur le D. congolensis ont montré que l'huile essentielle, l'eau florale et les standards de l’acide oléique et de certains terpènes (le bornéol, l’a-caryophyllène, le B-caryophyllène, l'oxyde de caryophyllène, le phytol, le tau-cadénol et la 2,3-diméthylnaphtalène-l,4-dione) ne présentent aucune activité antimicrobienne.