Activity–guided discovery of highly potent antiplasmodial sub–fractions from Terminalia mantaly.

Abstract

L’émergence des résistances aux ACTs souligne l’urgence de la recherche de nouveaux antipaludéens et c’est dans cette logique que la présente étude a été définie. L’activité antiplasmodiale in vitro des extraits de Terminalia mantaly (Tm) et de Terminalia superba (Ts) a été étudiée contre les souches chloroquine-sensible 3D7 (Pf3D7) et chloroquine-résistante INDO (PfINDO) de P. falciparum. Douze extraits bruts obtenus par macération méthanolique et aqueuse des poudres de feuilles, d’écorces de tronc et de racines de Tm et Ts ont été testés in vitro sur PfINDO et Pf3D7 via le test de fluorescence au SYBR Green–I. L’évaluation de la cytotoxicité des extraits actifs sur les cellules embryonnaires du rein humain (HEK239T) a été faite par la méthode spectrophotométrique utilisant le MTT. Les extraits aqueux de feuilles (Tmlw), d’écorces de tronc (Tmsbw) de Tm, de feuilles (Tslw) et l’extrait méthanolique des racines (Tsrm) de Ts, ont été sélectionnés puis soumis à un double fractionnement bioguidé par épuisement des extraits avec des solvants de polarité croissante, suivi d’une chromatographie sur colonne de la fraction la plus active (IC50 < 2 µg/mL) par espèce. L’étude phytochimique de neuf sous–fractions très actives de Tm a été faite par la CPG couplée à la SM. L’étude de l’inhibition des différents stades de croissance intraérythrocytaire de P. falciparum a été effectuée avec les cinq sous–fractions les plus actives de Tm (IC50 < 1 µg/mL), par un examen microscopique des frottis de culture de Pf3D7 sous coloration différentielle au Giemsa, suivi d’un dénombrement d’érythrocytes parasités par cytométrie de flux. Des résultats obtenus, le dégrossissement des extraits Tmlw, Tmsbw, Tslw et Tsrm (IC50PfINDO, IC50Pf3D7 : 0,26–2,66 µg/mL ; 75 < SIPfINDO, SIPf3D7 > 769) a permis d’obtenir 61 sous–fractions, dont 39 provenant de la fraction TmsbwM (IC50PfINDO/Pf3D7 : 0,39/1,28 µg/mL ; SIPfINDO/Pf3D7 > 512/156) de Tm et 22 de la fraction TsrmEA (IC50PfINDO/Pf3D7 : 1,65/1,82 µg/mL ; SIPfINDO/Pf3D7 > 109/121) de Ts. Neuf sous–fractions toutes de Tm et codifiées Tm25, Tm28-30, Tm33-36 et Tm38, ont montré une excellente activité (IC50PfINDO, IC50Pf3D7 : 0,41–0,84 / 0,29–1,06 µg/mL ; 50 < SIPfINDO, SIPf3D7 > 344). La sous–fraction Tm36 (IC50PfINDO/Pf3D7 : 0,41/0,29 µg/mL, SIPfINDO/Pf3D7 > 243/344) a présenté la meilleure activité biologique. L’étude phytochimique a permis de recenser 104 composés. En outre, une analyse croisée des profiles phytochimiques a permis d’identifier 15 composés, qui seraient à la base de l’excellente activité antiplasmodiale des extraits d’écorces de tronc de Tm. Les sous–fractions Tm28,Tm29, Tm30, Tm36 et Tm38 ont inhibé tous les stades asexués du cycle intraérythrocytaire de P. falciparum, avec un effet prononcé sur le stade en anneau, les processus de libération et d’invasion des mérozoïtes. Les résultats de cette étude démontrent pour la première fois le potentiel antiplasmodial in vitro de Terminalia mantaly. Cependant, des investigations poussées seront nécessaires pour caractériser les molécules aux nouveaux mécanismes d’action, qui serviront de base au développement des nouveaux médicaments antipaludéens.